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熒光顯微鏡分類及鏡檢術(shù)注意事項(xiàng)
2012-07-23
熒光是用短波長(zhǎng)的光線照射用熒光素染色過的被檢物體，使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光，然后觀察。熒光顯微鏡廣泛應(yīng)用于生物等領(lǐng)域。
(1)熒光顯微鏡一般分為透射和落射式兩種類型:
a.透射式：激發(fā)光來自被檢物體的下方，聚光鏡為暗視野聚光鏡，使激發(fā)光不進(jìn)入物鏡，而使熒光進(jìn)入物鏡。它在低倍情況下明亮，而高倍則暗，在油浸和調(diào)中時(shí)，較難操作，尤以低倍的照明范圍難于確定，但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。
b.落射式：透射式目前幾乎被淘汰，新型的熒光顯微鏡多為落射式，光源來自被檢物體的上方，在光路中具有分光鏡，所以對(duì)透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用，不僅便于操作，而且從低倍到高倍，可以實(shí)現(xiàn)整個(gè)視場(chǎng)的均勻照明。
(2)熒光鏡檢術(shù)的注意事項(xiàng):
a.激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象，因此盡可能縮短觀察時(shí)間，暫時(shí)不觀察時(shí)，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光。
b.作油鏡觀察時(shí)，應(yīng)用"無熒光油"。
c.熒光幾乎都較弱，應(yīng)在較暗的室內(nèi)進(jìn)行。
d.電源最好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。
目前許多新興生物研究領(lǐng)域應(yīng)用到熒光顯微鏡，如基因原位雜交(FISH)等等。
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